超凈工作臺在細胞培養實驗中的應用

超凈工作臺在細胞培養實驗中的應用

時間:2021-4-15 編輯:wps-admin

超凈工作臺在細胞培養實驗中的應用:
植物組織具有無限增殖和產生不定芽、不定根的能力。在培養條件適宜時,只要通過一個超凈工作臺,以及用一個芽可以培養出許多植株來。其在保持優良砧木及品種種性、進行工廠化育苗方面具有很好的意義。

超凈工作臺在細胞培養實驗中的應用

超凈工作臺在細胞培養實驗中的應用方法步驟如下:
一、外植體接種與材料消毒
取田間當年生新梢或一年生枝蔓,去葉,用肥皂水將表面刷洗,并用自來水沖洗干凈,剪成一芽一段,放入干凈燒杯,拿進超凈工作臺;先用70%酒精過一下,無菌水(用高壓鍋,在120℃下,滅菌30分鐘的水)沖洗3遍;再用0.1%升汞液消毒5~10分鐘,無菌水沖洗3遍;然后用酒精燈火焰消毒過的工具(鑷子、剪刀、撥針、解剖刀等)剝去鱗片、葉柄,取出帶數個葉原基的幼芽接入培養基,半包埋。培養基配好后裝入廣口的罐頭瓶、三角瓶或試管,裝入量為1~2厘米高。120℃滅菌30分鐘后備用。

超凈工作臺在當今醫學、生物科學、食品科學和電子科學等研究領域中已經成為一種必不可少的實驗室設備??茖W家們需要超凈工作臺來提供一個潔凈的,無塵的試驗環境,來保護昂貴的樣本不會受到污染,以及危險的樣品不泄露到周圍環境中。超凈工作臺正是為了滿足用戶這方面的要求而出現的。

外植體接種后放到培養室的培養架上培養。培養條件為:光照1000勒克斯,8~10個小時,暗14~16小時;溫度25~28℃。培養1~2周,即可看出是否消毒徹底,有無感染。及時檢查,將未感染的外植體轉接到新的培養瓶內,丟棄已感染的外植體。

二、繼代繁殖
接入的外植體培養1~2個月,即可長到2~3厘米長。在超凈工作臺上,將其剪成約1厘米長莖段,接種到新的培養基中(培養基的配方同上)。剪莖段時所用工具和培養皿(或牛皮紙)都要經過消毒,消毒方法分別同上述酒精燈消毒法和高壓消毒法。

其后,大約每25天左右進行一次繼代培養。每次的莖段增殖量約為3~4倍。反復進行,直到所需數量。
三、生根
以上培養的莖段長到2厘米以上時,即可用于生根。生根培養基的成分為培養基的大量元素減半,除激素和蔗糖外,其他成分不變。
生根培養基配好后也需高壓滅菌(120℃,30分鐘)后使用。

生根培養20天左右,莖段上即可長出根,成為完整苗。生根苗長到3~5厘米長時即可鍛煉、移栽。

四、生根苗的鍛煉、移栽
(一)鍛煉
組培苗在人工培養條件下長期生長,對自然生長環境的適應性減弱。移栽前需要一個過渡階段,即鍛煉。鍛煉方法為:將培養瓶移至自然光照下2~3天,打開瓶口2~3天,再移栽。
(二)移栽:
移栽時先洗凈根上培養基,避免培養基感染雜菌致苗死亡。移栽方法及灌水、遮陽等管理同實生苗移栽。但注意組培苗比較嬌嫩,需輕盈操作。

五、工廠化育苗:
將以上培養基制備及超凈工作臺相關、裝瓶、消毒、無菌苗增殖、生根、鍛煉、移栽等過程全部放在實驗室和溫室中進行,即為工廠化育苗。目前,這樣的生產線已在意大利和法國投入使用。但外植體接種尚需人工操作。

超凈工作臺的工作原理:
超凈工作臺由三個基本的部分組成:高效空氣過濾器,風機,箱體,僅僅以上三部分,就可以構成一個超凈工作臺,當然,這樣的產品不會有人購買,所以制造商會給它裝上很多輔助系統,有些很有用,有些很無聊。

超凈工作臺分為兩種,一種是垂直流超凈工作臺,即工作區域的空氣流動方向是垂直的,另一種是水平流,即空氣是水平流過工作區域的。一般多見的是垂直流超凈工作臺,所以本文主要介紹垂直流超凈工作臺。

對超凈工作臺而言,主要的就是空氣循環過濾的過程,這就是一切超凈工作臺為達到潔凈目的采取的基本手段,在這個過程中,風機起到了心臟的作用:它泵浦箱體內的空氣,使它不段的循環,更新;箱體就象人的身體,它的氣密性使外界渾濁的空氣無法侵入,并且為空氣循環提供了風道;

高效過濾器捕捉空氣中塵埃,使通過它的空氣潔凈。這里,需要注意的是超凈工作臺里不是處處是潔凈的,過濾器和空氣循環模式只能保證空氣離開過濾器出風口后在部分空間內是純凈的,一般這個空間被稱為工作區域,只有在這個區域操作,才是安全的。而最臟的,不用說,就是過濾器本身了。開環空氣循環模式主要特征是在每次循環中所有空氣從外界采入并最終都回到環境中去,一般水平流的凈化臺都采用開環模式。

這種模式的超凈工作臺結構較簡單,成本低廉,但是風機和過濾器的負載較大,對其壽命會產生不良影響。同時完全開環的空氣循環的潔凈效率不高,且外排的空氣可能會攜帶部分樣本中的細菌等,可能會對環境造成危害。通常只用于潔凈要求較低的或是無生物危害的場合。

可見,閉環模式其實也不是完全封閉的氣流循環,每次循環中將有的空氣排放到環境空間,但這些外排的氣體已經過一個外排高效空氣過濾器的過濾。的氣體流過工作區域后經導流孔重新進入下一個循環過程,較外界吸入的空氣而言,這些氣體還是比較純凈的,這樣過濾器的負載就較小,壽命也會較長。這種空氣循環模式為目前主流產品所采用。

對于這個問題,人人都有自己的見解,這里只是闡述本人的一些建議,供諸位參考。
無論銷售人員在你面前如何炫耀各種新奇的技術,你一定要注意這種超凈工作臺使用的風機和高效過濾器,這兩樣東西代表了產品的技術水平,是無法作偽的。

很遺憾,風機和高效空氣過濾器國內的水平比國外產品差了很多,所以國內生產的高檔產品一般采用的是進口的過濾器和風機很多人會對你說“我們采用的是高效空氣過濾器”,因為各國對高效空氣過濾器定義和標準是不同的,甚至測試方法也有較大差異,所以最好不要把高效空氣過濾器這個概念和過濾器真正的過濾效率等同起來。

可以要求供應商提供類似對微米顆粒過濾效率大于的過濾器的過濾效率數據,顆粒越小,過濾捕捉效率越高,則該過濾器性能越好,值得注意的是國際上一般采用的測試方法是光子計數法,而國內通用的測試方法是鈉焰法。
當然隨著國內工業水平的快速提高,現在國產的超凈工作臺已經不會比進口的差多少了,對于一般的百級潔凈區要求的話,國產的超凈工作臺已經綽綽有余了。

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